欢迎光临 上海邦景实业有限公司! 联系电话:021-52960951   021-52960952
产品分类
浏览历史
当前位置: 当前位置: 首页 > 技术文章 > 介绍细胞株保存方法

网站信息

介绍细胞株保存方法

细胞株(Cell Strain)通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的培养物。是用单细胞分离培养或通过筛选的方法,由单细胞增殖形成的细胞群。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。现在来一起了解细胞株保存方法:

                                                                                                                               

保存方法:

 

1、将所需的培育基,胰酶确保瓶身洁净后放于作业台面内,点燃酒精灯,将培育基和胰酶瓶口用酒精棉球擦洗后,再将瓶口对准在酒精灯上消毒2-3次,旋开瓶盖后再次分别消毒瓶口和瓶盖,分别放于酒精灯的两边。特别是将培育基瓶放于斜架上,瓶口对准酒精灯,且放在间隔酒精灯zui近的位置,瓶盖置于酒精灯的另一侧。

 

 

2、将培育瓶瓶口在酒精灯上消毒2-3次,旋开后分别再次消毒瓶口和瓶盖2-3次,盖放于酒精灯右侧后将培育瓶内的培育液悬空倒进污缸,在酒精灯消毒2-3次瓶口,竖直放好。取1ml移液器快速移动在酒精灯上消毒1-2次,然后再装上枪头汲取1.5ml胰酶液,悬空移入培育瓶内。

 

 

3、将培育使胰酶浸没整个瓶壁的细胞层,计时约40s,立马竖起对着灯光可观察到细胞与细胞之间有zhen孔样缝隙,并有1-2个细胞掉落,这时为胰酶消化的zui适时机。若看到成片的细胞从瓶壁掉落为胰酶消化过度;若看不到zhen孔样缝隙和细胞掉落,则需持续消化,悄悄的敏捷平放培育瓶使胰酶浸没细胞层1s后敏捷竖起对着灯光观察细胞情况,可反复几回,直至出现zhen孔样缝隙和1-2个细胞掉落的消化状况。用移液器将胰酶吸净。

 

 

4、汲取1ml细胞冻存液于培育瓶内,并用移液器汲取少数的培育基轻柔的反复冲洗培育瓶壁5-8次,使贴壁细胞彻底掉落于培育基内再悄悄吹打2-3次,使细胞尽可能处于单个悬浮状况。

 

 

5、将1ml含有细胞的冻存液移入新的保种管内,拧紧瓶盖,做好试验符号。

 

 

6、将培育基瓶口和瓶盖消毒2-3次后拧紧,熄灭酒精灯,收拾试验台面,取出试验试剂及污缸等,封闭超净作业台。

 

 

7、将保种管先放于4℃冰箱 30min后拿出放置-20℃冰箱过夜,次日再放于-80℃的冰箱内3-4天,zui后存放于-196℃的液氮灌内长期保存。

 

 

注:此进程也可简化因实际操作进程中经历所得:步骤7结束后将保种管用干脱脂棉包裹后胶带封好直接放于-80℃冰箱内4-5天,即可放于液氮灌保存。但-80℃冰箱也可保存细胞株2-3月。 

contact
友情链接: