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牛痘病毒-拓扑异构酶商品属性:
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牛痘病毒-拓扑异构酶
500U
BJ-PJ6718
牛痘病毒-拓扑异构酶
5KU
BJ-PJ6718
商品介绍:描述:
该 Topoisomerase I 来源于牛痘病毒(vaccinia virus),通过基因重组方案制备纯化。其能解旋DNA的超螺旋结构,除此外其能识别并切割双链 DNA 末端 [5’C(T)CCTT↓],并且与 DNA 形成共价连接形成稳定复合物。该共价复合物遇
到DNA 的5’-OH基团后,重新连接形成完整 DNA 链。因此,使用该酶可作为 DNA 连接的有效工具,可用于 DNA 的载体连接(TOPO 克隆载体制备)、接头连接(NGS 建库)等实验。
应用
DNA-载体连接
接头连接
储存:-20°C 可保存 3 年。
TOPO 酶保存液:20mM Tris-HCl,pH7.8,150mM NaCl,
0.1% Tween20,50%甘油。
反应实例 1(质粒解旋)
10×TOPO Buffer 2.5 μl
超螺旋质粒 DNA 1-20 μg
Vaccinia TOPO (5pmol/μl) 1 μl
ddH2O Up to 25 ul
37°C 孵育 5-15min。
注意:(1)双链接头 A 通常 5’做 NH2 封闭修饰,以防止自连接;接头 A 的 CCCTT 后通常包含 5-12bp 尾巴,再长的尾巴会导致连接效率大幅下降;
(2)双链接头 B 的 5’端必须包含-OH。
(3)由于该酶应用广泛,在不同的实验中使用策略不同,需要灵活运用。
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