Extreme Thermostable Rnase HII（极耐热Rnase HII）

Extreme Thermostable Rnase HII（极耐热Rnase HII）

商品属性：

产品名称	规格	货号
Extreme Thermostable Rnase HII（极耐热Rnase HII）	200U	BJ-PJ6692

商品介绍：

描述：

该 RNase H2 是来源于极端耐热的菌株的内源性核酸内切酶，它识别 RNA/DNA 杂交链并切割 RNA 链，其对单链 RNA 切割活性极低，且对 dsDNA、ssDNA 无切割活性。该酶在 DNA/RNA duplex 的单核糖核苷酸残基
处从 5’端进行切割，切割后产生一个 5′端磷酸基团和一个3′端羟基。该 RNase H2 酶在 60-70°C 具有最佳活性，在 50°C 到 75°C 间均具有活性，但其在室温下活性非常低。该酶极度耐热，在 95°C 加热 30min 后仍保留全部活性，因此其与大多数的 PCR 缓冲体系兼容，可用于 RnaseHII 依赖性 PCR（rhPCR）等实验。

储存：-20°C 可保存 2 年。
单位定义：一个单位是指在 60°C 下，15 分钟切割 1nmol含有单个 RNA 的嵌合 DNA/RNA 杂交双链体底物所需的酶量。
本品为高浓度制品：使用时通常需要先用 15%甘油稀释到 2U/μl 后使用。
10XET RNase H2 Buffer: 200mM Tris-HCl, 500mM KCl,1% Tween20, 200ug/ml BSA, 50mM Mg2+, pH8.5.
使用方法（一）
DNA/RNA 杂交链 10-200pmol
10XET RNase H2 Buffer 2 μl
ET RNase H2 (2U/μl) 0.5 μl
ddH2O Up to 20 μl
50-70°C 反应 15min。
使用方法（二）-rhPCR 扩增
10XPCR Buffer 2 μl
10μM Blocked PrimerF 0.4 μl
10μM Blocked PrimerR 0.4 μl
Taq DNA Polymerase 0.5Unit
ET RNase H2 (2U/μl) 0.5 μl
DNA 模板 1 μl
ddH2O Up to 20 μl
反应：95°C 1min，循环 45 次（95°C 10s，60°C 30s）。
注意事项
1. 该酶在 50-75℃均有活性，其用量可根据不同的应用进行调节，该酶在室温 25 度情况下活性极低。
2.该酶用于 rhPCR（依赖于 Rnase H2 的 PCR ）时，需要使用 3′ 端带封闭基团的 DNA 引物（Blocked 引物）。引物 3’端可以采用 C3 Spacer 或 NH2 封闭，3’末端第 5位为单碱基的 RNA 碱基。
3. 该酶与绝大多数的 PCR 缓冲体系兼容，最佳 mg2+浓度 2~3mM。
4. 该酶极其耐热，95℃30min 活性无显著降低，故不可通过热失活，0.1% SDS 可将其失活。
5. 在 rhPCR 中推荐的使用浓度为 10~50mU/μl。