pET-28a(+) Seamless Cloning Kit（线性化质粒）

pET-28a(+) Seamless Cloning Kit（线性化质粒）

商品属性：

产品名称	规格	货号
pET-28a(+) Seamless Cloning Kit（线性化质粒）	20 μl	BJ-PJ6547

商品介绍：

产品介绍：
pET-28a(+)载体为高水平的原核表达载体，在N端含有His-Tag, Thrombin（凝血酶）酶切位点，T7-Tag，在C端具有His-Tag。本产品提供pET-28a(+)经EcoRⅠ酶切后的线性化载体，可用无缝克隆技术将单个或多个DNA片段组装到载体上。
无缝克隆技术可在重组酶的作用下，只需一步反应，便可将片段克隆到任何载体中的任意位置，得到重组质粒。无缝克隆技术作为一种非常强大的克隆技术，具有快速、简便、高效、多片段组装和定向克隆等特点，用于单个 DNA 片段的克隆，多个 DNA 片段组装克隆以及多位点突变构建等实验目的。
产品特点：
1. pET-28a载体为原核表达载体，具有N-His, N-Thrombin, N-T7和C-His。
2. pET-28a经EcoRⅠ酶切后的线性化载体，省时省力。
3. 无缝克隆技术只需要简单的 PCR 扩增就可以制备片段DNA。
4. 可以克隆长片段和多片段DNA。
5. 简单、快速、精确、定向克隆。
操作步骤：
1. pET-28a(+)线性化载体使用方法：
(1) pET-28a(+)线性化载体当做克隆载体使用，可以在扩增PCR产物的
上游引物 5’端添加序列：GCCTGGTGCCGCGCGGCAGCCATATG（需要5’端HIS标签时）
或者AACTTTAAGAAGGAGATATACCATG（不需要5’端HIS标签时）
下游引物 5’端添加序列：CTCAGTGGTGGTGGTGGTGGTGCTCGAG（需要3’端HIS标签时）
或者CTCAGTGGTGGTGGTGGTGGTGCTCGAGTCA（不需要3’端HIS标签时）
通过无缝克隆连接到pET-28a(+)中。
(1) 测序引物
T7: 5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3'
T7t: 5'-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3'
-2
pET-28a(+)线性化载体为 EcoRⅠ酶切后的线性化载体，图谱及多克隆位点见下图。