近平滑假丝酵母基因组DNA

商品属性：

产品名称	近平滑假丝酵母基因组DNA
英文名称	Genomic DNA from Candida parapsilosis
规格	5μg/支
货号	BJ-J2138

商品详情

培养基	酵母浸粉：3.0，麦芽提取物：3.0，葡萄糖：10.0，酪蛋白胨：5.0，琼脂：20.0，pH：6.2±0.2（25℃）
传代方法	使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签； 1.取酵母细胞（最多不超过5×107cells），12,000rpm(13,400×g)离心1min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）； 2.酵母细胞壁的破除：酶法：向菌体中加入600μL山梨醇buffer，加入大约50U Lyticase，充分混匀。30℃处理30min。4000rpm(1500×g)离心10min，弃上清，收集沉淀。注意：以上为5×107酵母细胞的Lyticase用量，根据酵母的菌株和酵母细胞数量的不同，所用Lyticase的浓度和孵育时间应该进行适当调整； 3.向沉淀中加入200μL缓冲液GA重悬沉淀，充分混匀。如果需要去除RNA，可加入4μL RNase A（100mg/mL）溶液，振荡15sec，室温放置5min； 4.加入20μL Proteinase K溶液，混匀； 5.加入220μL缓冲液GB，充分颠倒混匀，70℃放置10min，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。注意：加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀，一般70℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取的DNA不纯； 6.加220μL无水乙醇，充分颠倒混匀，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠； 7.将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中），12,000rpm(13,400×g)离心30sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中； 8.向吸附柱CB3中加入500μL缓冲液GD（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm(13,400×g)离心30sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中； 9.向吸附柱CB3中加入600μL漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm(13,400×g)离心30sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中； 10.重复操作步骤9； 11.将吸附柱CB3放回收集管中，12,000rpm(13,400×g)离心2min，倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验； 12.将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200μL洗脱缓冲液TE，室温放置2-5min，12,000rpm(13,400×g)离心2min，将溶液收集到离心管中。注意：为增加基因组DNA的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱中，室温放置2min，12,000rpm(13,400×g)离心2min。洗脱缓冲液体积不应少于50μL，体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解；
生长条件	30℃；18-24h；好氧；
存储条件	2-8℃
安全等级	0
共享方式	公益性共享