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口蹄疫病毒A型/O型(FMDV-A/-O)核酸检测试剂盒





口蹄疫病毒A型/O型(FMDV-A/-O)核酸检测试剂盒

  • 商品货号:BJ-P8218
    商品库存: 100
  • 商品品牌:邦景/BHBT
  • 上架时间:2022-10-20
    商品点击数:297

商品描述:

商品属性

  本产品仅供科研使用.请勿用于医药,不能用于临床治疗诊断使用!

产品属性:
产品名称 规格 货号
口蹄疫病毒A型/O型(FMDV-A/-O)核酸检测试剂盒 50T BJ-P8218

实验所需但试剂盒未包含材料:

1、1.5ml 无菌低吸附离心管
2、 96 孔 qPCR 板
3、 一次性手套
4、 1000ul 、100ul 、10ul 无菌低吸附带滤芯移液枪头
相关设备:
1、离心机
2、涡旋振荡器
3、荧光定量 PCR 仪
4、 1000ul 、100ul 、10ul 移液器
特点:
1. 即开即用,用户只需要提供样品 DNA 模板。
2. 引物和探针经过优化,灵敏性高。
3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4. 特异性高,引物是根据巴西副球孢子菌高度保守区设计,不会跟其他病毒 DNA 发
生交叉反应。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 PCR 反应。
6. 本产品只能用于科研。
规格及成分:
编号 成分 规格
试剂一 2×Probe qPCR MagicMix 500 μL(本色盖)
试剂二 荧光PCR专用模板稀释液 1 mL(黄盖)
试剂三 巴西副球孢子菌qPCR引物混合液 100 μL(白盖)
试剂四 巴西副球孢子菌qPCR探针 50 μL(棕色管)
试剂五 巴西副球孢子菌探针法qPCR阳性对照(1×10E8拷贝/μL) 50 μL(红盖)


口蹄疫病毒A型/O型(FMDV-A/-O)核酸检测试剂盒使用方法:
一、稀释标准曲线样品
(以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液,最好用带芯枪头,下同)。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供),充分震荡 1 分钟,得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7. 如果有 N 个样品,最好设置 N+2 个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳性对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL 阳性对照的 10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为 NC。
8. 用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数 DNA 提取试剂盒兼容。
三、Probe qPCR 反应(20μL 体系,在样品制备室进行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复,则标记 N+9 个 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),6个用于标准曲线。如果做定性分析,并且只做 1 次重复,则标记 N+4 个 PCR管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),1 个用于 PCR 阳性对照(用第 4 号管的阳性对照稀释液做模板)。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
10. 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加):

成份 N+2 个样品管 PCR 阴性对照管 标准曲线样品管(2-7管)
2×Probe qPCR MagicMix 10μL 10μL 各10μL
巴西副球孢子菌qPCR探针 1μL 1μL 各1μL
巴西副球孢子菌探针法qPCR引物混合液 2μL 2μL 各2μL
N+2个待测DNA模板
7μL
-- --
超纯水 -- 7μL --
第7步所得标准曲线样品稀释液(2-7号) -- -- 各7μL(2号样到2号管,3号样到3号管…)

11. 盖上盖子后上机,按下面参数进行 PCR:

过程 温度 时间
预变性 95℃ 3 min
PCR 反应(40 个循环) 95℃ 15 sec
60℃ 1 min(采集FAM通道的荧光信号)  

12. 如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 RNA浓度的 log 值,再推算出其浓度。

口蹄疫病毒A型/O型(FMDV-A/-O)核酸检测试剂盒四、数据处理

13. 如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照 Ct 必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct 值应该小于或等于 30。对待测样品,如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性,如果小于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间,则重复一次。若重复结果 Ct值小于 40,扩增曲线有明显起峰,该样本判断为阳性,否则为阴性。

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