Matrigel 基底膜基质，无酚红

 Matrigel   基底膜基质，无酚红，Matrigel基质会有色差变化（淡黄色到深红色），是由于酚红和碳酸氢盐与CO2作用引起的，但是与5％CO2平衡后色差即会减少。冻融后，轻轻摇晃试剂瓶使Matrigel分散均匀。所有操作均需在无菌环境下进行，试剂瓶瓶盖可用70％乙醇擦拭，并自然干燥。应使用预冷的移液器以保证Matrigel呈匀浆状。

Matrigel, Reduced Growth Factor（Matrigel RGF）是低生长因子的基质胶，基于标准级别的基底膜/基质胶进一步纯化以去除其内所含的生长因子水平，包括EGF、IGF、FGF、TGF-β 等，其中TGF-β 由于偶联在胶原酶IV上和/或在纯化过程中与胶内的主要成分聚集在一起，浓度降低的相对比较少。本基质胶（低生长因子）适用于更广的细胞培养研究，包括2D/3D培养、血管生成、肿瘤细胞迁移和细胞侵袭、体内肿瘤模型建立等。特别适用于对基质成分更为严格的实验，如信号转导相关研究、阐释生长因子功能的研究或者基因表达研究等。本品为无菌制品，浓度为9-20mg/ml。
储存条件：-20℃，有效期六个月。

 

操作指南：

BD采用技术，从富含胞外基质蛋白的EHS小鼠肿瘤中分离出BD Matrigel 基底膜基质，其主要成分由层粘连蛋白，Ⅳ型胶原，巢蛋白，硫酸肝素糖蛋白等组成，还包含生长因子和基质金属蛋白酶等。BD Matrigel基底膜基质在室温条件下，聚合形成具有生物学活性的三维基质，模拟体内细胞基底膜的结构、组成、物理特性和功能，有利于体外细胞的培养和分化，以及对细胞形态、生化功能、迁移、侵染和基因表达的研究。

 

BD Matrigel 基底膜基质形成的三维培养基质，可促进上皮细胞、肝细胞、Sertoli细胞、黑色素瘤细胞、血管内皮细胞、甲状腺细胞及毛囊细胞等的贴壁与分化。同时，Matrigel还能影响乳腺上皮细胞的蛋白表达，支持外周神经的新生和牛输卵管上皮细胞的分化。高浓度的Matrigel适用于研究体内血管生成和肿瘤细胞迁移及肿瘤模型的建立等。

 

细胞可在0.5mm厚度的Matrigel基质层表面生长，也可在1mm厚度的Matrigel三维基质内生长。过度稀释的Matrigel会形成非胶质的蛋白层，可以用于细胞贴壁，但不能用于细胞的分化研究。

注意：可将冻融后的Matrigel分装在多个小管，所有分装均需用预冷的冻存管，迅速冷冻并保存，避免多次冻融。

推荐包被与成胶方法：

注意：为了保证Matrigel基质膜的成胶性能与稳定性，稀释浓度不应低于1：3，可用无血清培养基稀释，Matrigel成胶后立即使用。

薄胶成胶方法：

     1.冻融后，用预冷的移液枪头混匀Matrigel基质成匀浆状。

     2.将需要使用的培养板置于冰上，加入浓度为50μL/cm2生长面积的Matrigel基质。

     3.在37℃放置30分钟，即可使用。

厚胶成胶方法：

     1.冻融后，用预冷的移液枪头混匀Matrigel基质成匀浆状。

     2.将需要使用的培养板置于冰浴，将培养的细胞与Matrigel基质混合，用移液枪头使其悬浮于基质中。加入浓度为150－200μL/cm2生长面积的Matrigel基质。

     3.在37℃放置30分钟，可成胶。可以加入细胞培养的基质，也可使细胞直接生长在胶表面。

薄层包被方法：

    1.冻融后，用预冷的移液枪头混匀Matrigel基质成匀浆状。

    2.根据使用需要，采用无血清培养基稀释Matrigel基质。根据实验需要确定最佳包被浓度。

    3.将稀释的Matrigel基质包被于所需的培养器皿中，包被量至少覆盖整个器皿的生长表面。室温下孵育1小时。

4.去除未结合的Matrigel，用无血清培养基轻轻地冲洗。