Matrigel 基底膜基质

 Matrigel 基底膜基质，Matrigel基质会有色差变化（淡黄色到深红色），是由于酚红和碳酸氢盐与CO2作用引起的，但是与5％CO2平衡后色差即会减少。冻融后，轻轻摇晃试剂瓶使Matrigel分散均匀。所有操作均需在无菌环境下进行，试剂瓶瓶盖可用70％乙醇擦拭，并自然干燥。应使用预冷的移液器以保证Matrigel呈匀浆状。

Matrigel基底膜/基质胶形成的三维培养基质，可促进上皮细胞、肝细胞、塞尔托利氏细胞、黑色素瘤细胞、血管内皮细胞、甲状腺细胞及毛囊细胞等的贴壁与分化。Matrigel能影响成鼠肝脏细胞和人乳腺上皮细胞三维培养物的基因表达。同时，Matrigel可用作多种肿瘤细胞侵袭研究的基本支架，体内外血管新生研究必须的基质，以及体内动物模型移植瘤细胞生长的三维支架。Matrigel还能支持外周神经的新生和牛输卵管上皮细胞的分化。

操作指南：
BD采用技术，从富含胞外基质蛋白的EHS小鼠肿瘤中分离出BD Matrigel 基底膜基质，其主要成分由层粘连蛋白，Ⅳ型胶原，巢蛋白，硫酸肝素糖蛋白等组成，还包含生长因子和基质金属蛋白酶等。BD Matrigel基底膜基质在室温条件下，聚合形成具有生物学活性的三维基质，模拟体内细胞基底膜的结构、组成、物理特性和功能，有利于体外细胞的培养和分化，以及对细胞形态、生化功能、迁移、侵染和基因表达的研究。

BD Matrigel 基底膜基质形成的三维培养基质，可促进上皮细胞、肝细胞、Sertoli细胞、黑色素瘤细胞、血管内皮细胞、甲状腺细胞及毛囊细胞等的贴壁与分化。同时，Matrigel还能影响乳腺上皮细胞的蛋白表达，支持外周神经的新生和牛输卵管上皮细胞的分化。高浓度的Matrigel适用于研究体内血管生成和肿瘤细胞迁移及肿瘤模型的建立等。

细胞可在0.5mm厚度的Matrigel基质层表面生长，也可在1mm厚度的Matrigel三维基质内生长。过度稀释的Matrigel会形成非胶质的蛋白层，可以用于细胞贴壁，但不能用于细胞的分化研究。
注意：可将冻融后的Matrigel分装在多个小管，所有分装均需用预冷的冻存管，迅速冷冻并保存，避免多次冻融。

推荐包被与成胶方法：
注意：为了保证Matrigel基质膜的成胶性能与稳定性，稀释浓度不应低于1：3，可用无血清培养基稀释，Matrigel成胶后立即使用。
薄胶成胶方法：
     1.冻融后，用预冷的移液枪头混匀Matrigel基质成匀浆状。
     2.将需要使用的培养板置于冰上，加入浓度为50μL/cm2生长面积的Matrigel基质。
     3.在37℃放置30分钟，即可使用。
厚胶成胶方法：
     1.冻融后，用预冷的移液枪头混匀Matrigel基质成匀浆状。
     2.将需要使用的培养板置于冰浴，将培养的细胞与Matrigel基质混合，用移液枪头使其悬浮于基质中。加入浓度为150－200μL/cm2生长面积的Matrigel基质。
     3.在37℃放置30分钟，可成胶。可以加入细胞培养的基质，也可使细胞直接生长在胶表面。
薄层包被方法：
    1.冻融后，用预冷的移液枪头混匀Matrigel基质成匀浆状。
    2.根据使用需要，采用无血清培养基稀释Matrigel基质。根据实验需要确定最佳包被浓度。
    3.将稀释的Matrigel基质包被于所需的培养器皿中，包被量至少覆盖整个器皿的生长表面。室温下孵育1小时。
4.去除未结合的Matrigel，用无血清培养基轻轻地冲洗。