T4 DNA连接酶

T4 DNA连接酶
中文名称： T4 DNA连接酶 
英文名称： T4 DNA Ligase 
产品规格： BR,1u/ul 
包装： LC1000U 
产品规格： BR,5u/ul 
包装： 200U/1000U 
产品规格： BR,30u/ul 
包装： HC5000U 
CAS号：9015-85-4
分子量：55.3kDa，单体
T4 DNA连接酶级别：BR
分子量：55.3kDa，单体
来源：含有T4噬菌体克隆基因30的大肠杆菌
浓度：1u/ul(200CEU/ul）
浓度：5Weiss u/ul(1000CEU/ul）
浓度：30Weiss u/ul(6000CEU/ul）
活性定义：是指在ATP-PPi交换反应中，37℃、30分钟内将1nmol [32PPi]转换为Norit可吸收形式所需的酶量（weiss单位，1个weiss单位相当于约200个粘性末端连接单位。1个粘性末端连接单位：20ul反应体系（50mM Tris-HCL(PH7.5), 10mM DTT, 10mM MgCL2, 1mM ATP, 25ug/ml BSA, 12uM(300ug/ml)的5-DNA末端）中，在16℃、30分钟内连接50%连接HindIII酶切的Lambda DNA 产物所需的酶量） 
酶活性分析混合物：66mM Tris-HCL(PH7.6), 10mM DTT, 6.6mM MgCL2, 0.066mM ATP, 3.3uM[32PPi]
保存液组分：20mM Tris-HCL(PH7.5), 50mM KC1, 1mM DTT，0.1mM EDTA和50%(v/v)甘油
10×T4 DNA Ligase缓冲液（#B69）：400mM Tris-HCL, 100mM MgCL2, 100mM DTT, 5mM ATP(PH7.5,25℃)
抑制剂：当反应体系中NaC1或KC1的浓度超过200 mM时，可强烈抑制T4 DNA Ligase活性
失活：65℃加热10分钟或70℃加热5分钟
注意：T4 DNA Ligase与DNA结合会改变条带的琼脂糖凝胶电泳迁移率，为避免此现象，电泳前需处理样本或分子量标准。样本处理如下：样本与Fermentas公司6×DNA Loading Dye&SDS溶液（#R1151）混合，75℃加热5分钟或65℃加热10分钟后冰浴保存；转化时，连接产物的体积不得超过感受态细胞体积中的10%；电转化之前，先用氯仿抽提方法除去连接混合物中的T4 DNA Ligase，然后经乙醇沉淀纯化抽提产物
质量控制：测试表明无内切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染。功能检测：粘性末端或平末端DNA的连接能力
性状：液体。该酶催化双链DNA或RNA中毗邻的5'磷酸基团和3'-羟基末端之间形成磷酸二酯键，还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA复合体中的单链切口，连接DNA的粘性和平末端，但该酶对单链核酸无酶活性。该酶需要辅因子ATP
T4 DNA连接酶用途：生化研究。粘性末端或平末端双链DNA的连接；双链寡核苷酸接头与双链DNA连接；双链DNA、RNA或DNA-RNA复合体中缺口的修复；连接酶介导的RNA检测；位点特异性突变；扩增片段长度多态性
保存： -20°C