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细胞传代操作步骤
传代培养是指需要将培养物分割成小的部分,重新接种到另外的培养器皿(瓶)内,再进行培养的过程。对单层培养而言,80%汇合或刚汇合的细胞是较理想的传代阶段。细胞传代的操作步骤:
1、首先,重要的是要清楚细胞需要监测的频繁程度,这取决于该细胞的扩增速度。
2、现在培养液为亮橙色,再观察其它生长情况。如培养液是否浑浊-如浑浊则可能有污染, 细胞的大小和密度以及细胞的总体质量。
3、如果细胞密度达到90%,吸去细胞培养液,用无钙离子和镁离子的磷酸缓冲液洗涤。
4、然后加入胰酶,置于37摄氏度约5分钟,确认细胞脱壁后,加入新鲜细胞培养液终止胰酶的水解。
5、将悬浮的细胞转移到锥形管离心。细胞离心下来后,小心弃去上清,重悬细胞于新鲜培养液。计数收集到的细胞然后根据合适密度接种细胞立即进行扩增或用于将来扩增。
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