蛋白试剂盒使用方法步骤
BCA蛋白试剂盒是进行蛋白质浓度测定的最常见的方法之一。BCA蛋白定量的主要原理是：蛋白质在碱性条件下，可以将二价Cu2+离子还原成一价Cu+离子。产生的一价Cu+离子可以与BCA（Bicinchoninicacid）试剂结合，最终生成紫色的复合物。该复合物在562nm处有很强的吸收峰。复合物的多少与蛋白质的浓度呈接近的线性关系。
使用方法步骤：
1、BCA工作液的配制
（1）BCA工作液总体积的计算：
BCA工作液总体积=（标准品数量+待测样品数量+1）×重复数×200μL。
举例：如果标准品数量为8，待测样品数量1，重复数为3，则BCA工作液总体积=（8+1+1）×3×200μL=6000μL
（2）BCA工作液的配制：按50体积的BCA试剂A中加入1体积的BCA试剂B（A:B=50:1），充分混匀。
举例：将5000μL的BCA试剂A与100μL的BCA试剂B混合，得到5100μL的BCA工作液。
2、BSA标准品的配制
将BSA标准品做系列稀释，分别得到如下9个不同浓度的标准品：2000μg/mL，1500μg/mL，1000μg/mL，500μg/mL，250μg/mL，125μg/mL，62.5μg/mL，31.25μg/mL，0μg/mL。
注：严格的蛋白定量，BSA标准品的稀释溶液应该与待测蛋白样品的溶液相同。但是一般情况下，BSA标准品可以直接用0.9%的NaCl、PBS或者去离子水进行稀释。
3、取BSA标准品和待测样品各25μL到96孔板孔内，
注：正常情况下，样品与BCA工作液的体积之比应为1:8。如果样品体积有限，也可使用10μLBSA标准品和待测样品进行检测（即样品与BCA工作液的体积之比为1:20），这时BCA定量试剂盒的检测范围较小为125-2000μg/mL。
4、往每孔中加入200μL的BCA工作液，盖上96孔板盖子。
5、将96孔板放37℃，30分钟。
6、用酶标仪测562nm处的光吸收值。
注：562nm为最强的光吸收波长。如果无法检测562nm处的光吸收值，也可以在540～595nm波长范围内检测光吸收值。
7、根据BSA标准品的光吸收值（扣除空白孔的光吸收值即为最终的读数），绘制标准曲线。依据标准曲线计算待测样品的蛋白浓度。
