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原代细胞培养中遇到的问题以及解决办法

错误1:

一小管原代细胞在水浴中解冻一段时间。

解决办法：

原代细胞对解冻过程非常敏感，因此将小瓶置于37℃水浴中，保持并轻轻旋转直到内容物刚刚解冻是很重要的。然后应立即从水浴中取出小瓶，并转移到无菌操作台。确保您的培养瓶在解冻前已经准备就绪，以便可以立即用于接种细胞，并置于培养箱中。

错误2:

解冻match小瓶后直接离心原代细胞。

解决办法：

我们不建议在解冻后离心细胞，因为离心程序比少量的DMSO残留更有害。记住，在恢复原代细胞后的第二天更换培养基以去除任何残留的DMSO。

错误3:

允许原代细胞变得过于融合。

解决办法：

当生长至100%汇合时，原代细胞可以变得衰老。记住，原代细胞不是100%纯，因此重要的是尽量减少污染细胞的生长。我们建议在细胞达到90-95%融合时，对原代细胞进行传代培养。

错误4:

传代原代细胞时过度胰蛋白酶消化。

解决办法：

当细胞传代时，使用低浓度的胰蛋白酶并在显微镜下密切监测细胞。此外，记得在胰蛋白酶消化后完全中和细胞中的胰酶，因为任何活性的胰蛋白酶都将损伤细胞。

错误5:

原代细胞可以很容易地重新冻存。

解决办法：

通常我们不推荐重新冻存原代细胞，因为这可以促进细胞衰老和/或导致功能变化。原代细胞非常敏感，重新冻结可能导致细胞死亡或损伤。

错误6:

原代细胞可以无限的增殖。

解决办法：

与细胞系不同，原代细胞具有有限的扩增能力。我们建议尽早使用原代细胞进行实验以防止遗传漂移。此外，如果你正在使用一个增值困难的细胞类型，你应该密切监测细胞形态，因为少量混杂的细胞(如成纤维细胞)可能随着时间的推移，大量生长从而成为主要细胞。