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LIC克隆过程
LIC克隆法 通过T4 DNA聚合酶的3'→5'核酸外切活性分别处理目的基因和载体的PCR产物，产生12nt的5'突出互补末端，利用突出的互补末端之间的退火进行基因克隆。12nt为人为额外添加。 克隆过程： 1、用5'端带有重叠序列的特异性引物分别扩增目的DNA基因和载体，获得带有重叠序列的目的基因和线性化质粒； 2、使用T4 DNA聚合酶的3'→5'核酸外切酶活性分别消化PCR扩增得到的目的基因和载体； 3、产生粘性末端后，添加某一成分dNTP，终止切割； 4、将带有重叠序列的两个片段进行退火，就形成了带有切口的环状质粒； 5、转化后，大肠杆菌内的修复机制修复损伤的DNA分子，经过复制得到大量目的质粒。
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