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永生化表皮细胞培养方法
永生化表皮细胞类型:贴壁生长 形态:CM8-1培养液中,贴壁,上皮细胞样,多角形 分离基物:该细胞源自一位62岁患有黑色素瘤男性的病灶外围正常皮肤,角蛋白、角化细胞交联外膜蛋白、中间丝相关蛋白阳性。 提供形式:复苏形式:T25培养瓶1瓶;或者冻存形式:2ml冻存管2支,干冰费另计。 培养方法 培养基:90%MEM(EBSS)+10%FBS 传代方法:将旧培养液吸除,PBS清洗两遍后,加入6mL(/100mm皿)胰酶,在显微镜下观察,期间禁止摇晃培养皿,细胞刚有脱落时,则吸除大部分胰酶,留约0.5mL,移至培养箱消化,约5min取出。传代用12mL CM8-1培养液终止消化,轻轻吹打均匀细胞,后可分3~6皿培养; 生长条件:37℃,5%CO2,CM8-1培养液。CM8-1培养液:90%EMEM+10%FBS。EMEM:EMEM培养液。 存储条件:冻存则用6mL冻存液(90%FBS+10%DMSO)终止消化,吹打均匀,分为6支冻存管,用程序降温盒于-80℃冻存,过夜转移至液氮中保存。
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