细胞长期保存方法解说
细胞是生命的基本单位。（除了病毒特殊一点。）细胞由细胞核组成和细胞膜还有线粒体等组成。常见的保存还是细胞属于活跃状态的常温保存或者根据细胞特性进行培养箱的温度调整保存, 如下是做为长期保存的方法：
1、冰冻保存：冰冻保存是最常见和简便的细胞保存方法之一。使用液氮或低温冰箱将细胞培养物冷冻保存在-80°C或更低的温度下。常用的冷冻液包括含有10%-20% DMSO（二甲基亚砜）的细胞保存液。
2、液氮保存：将细胞冷冻保存在液氮中，通常使用特殊的液氮保存管。液氮保存温度为-196°C，对于长期保存非常理想。在液氮保存时，细胞最好被冰冻在含有保护剂的冻存液中。
3、高温灭活保存：将细胞通过加热处理使其失去生物活性，常见的方法包括烘干、灭菌和石蜡包埋。这些方法适用于某些特定类型的细胞，如细菌和酵母菌。
4、冻干保存：将细胞冷冻干燥，以保存更长的时间。将细胞培养物先冷冻至低温，然后在真空条件下将冻结的水分直接转化为气体，最后封闭在密封的容器中。
一、冷冻保存方法：
1）、传统方法:
冷存管置于4 ℃10分钟--->-20 ℃30分钟--->-80 ℃ 16～18小时(或隔夜)--->液氮槽vaporphase长期储存。-20 ℃不可超过1小时，以防止胞内冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80 ℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
2）、程序降温：
利用已设定程序的等速降温机以-1～-3 ℃/分钟之速度由室温降至(-80 ℃以下)-120 ℃，再放在液氮槽vaporphase长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。
二、 操作步骤：
1）、冷冻前24-48小时更换半量或全量培养基，使细胞处于指数生长期。
2）、配制冷冻保存溶液(使用前配制)：另取一离心管，加入培养基、血清，逐滴加入二甲基亚砜 (DMSO)至20%浓度，即制成双倍的冻存液，置于室温下待用。
3）、离心收集培养之细胞，用加血清的培养基重悬起细胞，取少量细胞悬浮液(约0. 1 ml)计数细胞浓度及冻前存活率。
4）、取与细胞悬液等量的冻存液，缓慢逐滴加入细胞悬液，并晃动试管，制成细胞冻存悬液(DMSO后浓度为5～10%)，使细胞浓度为1～5×106cells/ ml，混合均匀，分装于已标示完全之冷冻保存管中，1～2 ml/vial，并取少量细胞悬浮液作污染检测。严密封口后，注明细胞名称、代数、日期。然后进行冻存。
三、 注意事项：
1）、欲冷冻保存之细胞应在生长良好(logphase)且存活率高之状态，约为80～90%致密度。冷冻前检测细胞是否仍保有其特有性质，例如hybridoma应在冷冻保存前一至二日测试是否有抗体之产生。
2）、细胞在液氮中可长期冻存无限时间，而不会影响细胞活力;在-70度可保存数月。
3）、注意冷冻保护剂之品质。DMSO应为试剂级等级，无菌且无色(以0. 22micron FGLP Telflon过滤或是直接购买无菌产品，如Sigma D-2650)，以5～10 ml小体积分装，4 ℃避光保存，勿作多次解冻。Glycerol亦应为试剂级等级，以高压蒸汽灭菌后避光保存。在开启后一年内使用，因长期储存后对细胞会有毒性。本方法中先制备双倍冻存液，可避免DMSO直接加入时释放的热量对细胞的损伤。缓慢逐滴加入细胞悬液是使细胞逐步适应高渗，可降低细胞受损。DMSO可能引起部分白血病细胞株的分化，可换用10%甘油冻存。
