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ELISA实验出现显色淡现象分析

        ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。在检测时,受检标本(测定其中的抗原)与固相载体表面的抗体反应。洗涤后加入酶标记的抗体,通过反应结合在固相载体上。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。

ELISA实验过程出现显色淡的现象,下面对其的原因及解决方案介绍:

    原因一:试剂盒在运输途中时间太长,温度太高。

    解决方案:尽量缩短运输时间,夏季应放冰块降温。

 

    原因二:试剂盒未充分平衡。

    解决方案:试剂盒从2~8℃冰箱取出后打开盒盖,于室温平衡至少20分钟,确保所有试剂已平衡至室温(约25℃)。

 

    原因三:培养箱温度不足37℃。

    解决方案:注意培养箱温度,放入反应板后尽量减少开启次数以免影响温度恒定,非隔水式培养箱尤其应注意。

 

    原因四:保温时间不足。

    解决方案:校正定时钟准确定时。

 

    原因五:洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增加。

    解决方案:按说明书要求保留洗涤时间,准确记住洗涤次数。

 

    原因六:移液器吸液量不足,吸嘴内壁挂水太多或内壁不清洁。

    解决方案:校正移液器,吸嘴要配套,装吸嘴时要紧密,吸嘴内壁要清洁,一次性使用。

 

    原因七:蒸馏水水质有问题。

    解决方案:使用新鲜合格的蒸馏。

 

    原因八:底物作用时间不足。

    解决方案:准确定时。    

   

    显色一定要控制时间,根据试剂盒说明操作即可。一般来说,显色时间过短,结果偏低;显色时间过长,空白增高或者非特异性显色增加。

 

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