资讯推送:ELISA试验洗板机洗板关键点
优化ELISA的重点之一在于洗涤。洗涤步骤可降低未结合抗体所引起的背景信号，从而增加分析的信噪比。每一步之间的洗涤确保只有特异的结合事件被保留，在最后一步产生信号。不充分的洗涤会导致差异和高背景，从而带来不理想的结果。在做ELISA实验时，洗板操作合乎要求，能得到正确、可靠的结果。
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ELISA试验过程中洗板机洗板人为因素少，速度快，条件恒定，但是使用洗板机洗板时应注意以下三个关键点。
1、洗涤参数
主要的参数是洗涤量。自动洗板机会分配洗涤液。如果你之前遭遇过高背景，那么不要犹豫，将洗涤量调为高，最好是比包被体积更高。太少的洗涤液会让一部分分析表面洗涤不到，从而明显增加背景。所有反应孔的洗涤量必须相同。
ELISA试剂盒的使用手册中列出包被量。我们建议使用350µl洗涤液进行洗涤，以便清洁整个反应孔的壁。一般来说，洗涤量越高，则孵育步骤残留的抗体或抗原量就越少。
2、洗涤次数
影响洗涤效果的主要参数是洗涤循环的量。当然，洗涤次数越多，背景越低。然而，太多次的洗涤会降低信号强度，使其难以测定。通常的做法是在每次抗体或抗原孵育后重复洗涤三次。不过，一般而言，包被平板需要的洗涤次数比用户包被的平板要少。对于用户包被的ELISA板，必须优化洗涤次数。
控制洗涤量和洗涤次数的另一种方法是加入过量的洗涤液。一般来说，96孔板的每个孔能容纳330至460 µl。不过，有些自动化洗板机可设置程序，分配远远超出这个量的洗涤液，比如1 ml。它是如何做到的呢?其实很简单，就是在分液的同时打开吸液功能。，随着分液器分配更多的液体，抽吸器也将液体吸出。这种技术能增加洗涤量，但不会溢出到其他孔中。
3、抽 吸
还有一些参数会影响洗涤步骤的效果。这些参数包括吸液高度和吸入位置，这两者都能调整，以降低背景(残留量)和差异。 残留液体中包含未结合的抗原或抗体，它们会增加背景信号。残留量越小，残留液体越少，转移到下一步的干扰液体也就越少。
吸液高度会明显影响残留量;如果洗涤吸头与反应孔底部的距离稍大，那就会让残留量急剧增加。反之，如果洗涤吸头压着反应孔底部，那么也会使吸液效率降低，残留量增加。
目前的洗板机一般使用两种类型的洗头：刚性和浮动。浮动洗头中的吸头可在洗涤过程中自由上下移动，而刚性洗头则固定在适当的位置。使用刚性洗头的洗涤操作在优化起来更为复杂，因为你需要非常仔细地调整吸液高度。如果你们实验室使用几种不同的板，那可能会很耗时。在使用浮动洗头时，吸头会降到反应孔的底部。调整高度就不是很重要，因此洗头会下降到底部。
抽吸的位置也对残留量有着重要影响;如果每个孔只使用一个抽吸点(这很常见，因为更快)，那么抽吸的位置需要优化。最佳的位置取决于洗头的性状，但它几乎不在反应孔的中间，即使这是所有洗头最常见的默认位置。一般来说，最佳位置在孔中间与孔壁之间的某处。反应孔的形状也会影响残留量。C形底(平底圆角)的微孔板一般会比那些平底尖角的微孔板残留量更低。
ELISA实验洗板目的在于将特异性结合于固相上的抗原(抗体)与温育过程中吸附的非特异性成份分离，使免疫复合物与待测抗体(抗原)呈一定比例，洗板是否合格直接影响检测结果的准确性。洗板应严格按照说明控制洗板时间及洗板次数， ELISA 检测一般用洗涤液洗板 3 次，洗涤液应严格按照操作说明进行稀释，洗液应注满每个微孔并注意洗液不外溢，垂直甩板避免交叉污染，防止出现假阴性及假阳性结果。使用洗板机洗板可一定程度上避免环境污染、提高工作效率，洗涤开始时注意观察每根吸液针是否一直插入孔底并吸干孔内全部液体，严格按照要求设置一定的洗板时间及洗板次数。洗板过程中注意冲力大小，避免冲力过大导致酶结合物丢失，吸光度值偏低。洗液应根据不同厂家的酶标板调整注水量，注意不要溢出孔外；稀释洗液所用的蒸馏水或去离子水酸碱度适中，使配出的洗液 pH 在 7.2~7.6 范围内，用非金属容器保存，保持液体新鲜无污染、沉淀。洗板结束后将板拍干，应垂直扣在备好的干净的吸水纸或毛巾上，且注意每次更新干净的吸水纸或毛巾。
洗板时注意以下问题：
(1)、需每天校正注液量及残液量，洗涤后残液量不得大于 2μl；
(2)、及时更换破损吸液针，避免破坏底板包被；
(3)、针对不同厂家酶标板注意调整吸液头下降高度，避免冲洗针头卡住酶标板；
(4)、注意调整洗液量，洗液量过多将溢出，过少将达不到洗涤效果；
(5)、关机前使用蒸馏水冲洗管道，避免洗液的结晶物堵塞管道；
(6)、不同种试剂盒的洗液严禁混合使用。临床操作中，工作人员由于担心洗板次数过少达不到去除非特异性物质的理想效果而增加洗板次数，最近研究发现，随着洗板次数的增加样本检测的 OD 值降低，造成假阴性结果及灰区标的漏检。
