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ELISA实验出现假阳性结果分析

ELISA是一种广泛应用在测定液体样本中的蛋白、抗体、或激素的免疫分析技术。ELISA实验以下操作步骤会假阳性：
1、加样
对于间接ELISA标本一般都要进行稀释，如果加样不准就会造成误差，尤其当稀释倍数大时，很小的绝对误差，会导致较大的相对误差，使阴性(或弱阳性)标本呈阳性(或阴性)。加样时应将所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。目前，大部分血站都已使用全自动酶免加样系统处理标本，可较好地避免以上误差。
2、洗涤
在ELISA中正确的洗涤是保证得到可重复结果的关健一步，应引起操作者重视。无论是手工操作还是机器操作，得出不正确的结果常与不正确的洗涤有关，ELISA就是靠洗涤来达到分离游离和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以消除残留在板孔中没能与固体抗原或抗体结合的物质，以及在反应过程中非特异性吸附于固相载体的干扰物质。
3、温育
每种试剂都有其最佳反应模式，其中温度和温育时间控制是重要因素。因孵育温度高，反应时间长，会造成整板本底高，阳性率高。温育一般用湿盒或水浴，反应板不宜叠放，以保证各板温度都能迅速平衡，为避免蒸发，板上应加盖。
4、酶标仪判读
作为记录测定结果的仪器，酶标仪的性能稳定与否，决定结果的可靠度。首先酶标仪应定期进行保养，对滤光片要定期校正；其次酶标仪波长设置要正确，最好使用双波长，一个检测波长，一个参比波长，以消除微孔板底部划痕、不平、指印或液面高度差异造成的光干扰。此外，在用酶标仪读数时最好先擦试微孔板底部并压平板条。由于各种酶标仪性能有所不同。